桿菌肽是由一組類似的多肽成分組成的混合物，其中桿菌肽A、B1和B2組分被認(rèn)為*抗微生物活性。獸醫(yī)臨床上常見(jiàn)以桿菌肽鋅和桿菌肽亞甲基水楊酸鹽形式用于畜禽促生長(zhǎng)和防治動(dòng)物的壞死性腸炎。在歐盟，亞甲基水楊酸桿菌肽還被推薦用于治療由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的兔壞死性腸炎。桿菌肽抗菌譜廣、吸收低，但會(huì)帶來(lái)神經(jīng)毒性和腎毒性，還會(huì)產(chǎn)生抗藥性風(fēng)險(xiǎn)，是治療中使用普通抗生素?zé)o效的最后選擇。若該類抗生素通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，會(huì)對(duì)人體造成健康隱患。因此我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留*》中明確規(guī)定了桿菌肽在動(dòng)物靶組織中的殘留*。

本文闡述了如何將桿菌肽從樣品基質(zhì)中分離提取出來(lái)，并經(jīng)過(guò)凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢測(cè)的形式。以提取、凈化為重點(diǎn)，依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T 20743-2006，為檢測(cè)人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。

檢測(cè)項(xiàng)目：桿菌肽

方法原理：試樣中桿菌肽殘留用酸化的甲醇水勻漿提取，經(jīng)雙硫腙CHCl?溶液進(jìn)行液液分配凈化后，再經(jīng)固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。

分析天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；高速組織搗碎機(jī)（10000 r/min）；振蕩器；離心機(jī)（4000 r/min）；離心管（10 mL和60 mL具塞）；貯液器（50 mL）；固相萃取真空裝置；氮吹儀；微量注射器（25 μL和100 μL）。

檢測(cè)儀器：LC-MS/MS+ESI源

樣品的制備與保存

豬肝臟、腎臟要去除脂肪和其他的非肝臟、腎臟組織，豬肉要去皮和骨頭，將其攪碎拌勻，分出0.5 kg作為試樣，將制備好的試樣密封，并做上標(biāo)記。試樣置于零下18 ℃條件下保存。

前處理方法

稱取10 g試樣（精確到0.01 g ）置于60 mL離心管中，加入0.1 mL甲酸和20 mL甲醇+水（1+1），于高速組織搗碎機(jī)上勻漿提取1 min，然后加入20 mL經(jīng)甲醇+水（1+1）飽和的0.0025 %雙硫腙CHCl?溶液，于振蕩器上劇烈振蕩10 min，以4000 r/min離心10 min，取上清液10 mL于50 mL試管中，棄去其余上清液。

往上述雙硫腙CHCl?溶液中加入30 mL水，搗碎殘?jiān)?，置于振蕩器上劇烈振?0 min，移取全部上清液于另一60 mL離心管中。重復(fù)提取一次，合并上清液，混勻，以4000 r/min離心10 min，取上清液30 mL與50 mL試管中的提取液合并，混勻。

在預(yù)處理過(guò)的固相萃取柱（HLB 60 mg/3 mL用3 mL甲醇和3 mL水活化）頂部連接貯液器，移入上述試管中樣液，待樣液全部通過(guò)萃取柱后，加入2 mL水，棄去全部流出液。然后，將固相萃取柱在50 kPa～55 kPa的負(fù)壓下抽干1 h，最后用2 mL甲醇洗脫，收集洗脫液于10 mL試管中，洗脫液在35 ℃水浴中用氮?dú)獯蹈?，?.5 mL甲醇重新溶解殘?jiān)偌尤?.5 mL 0.3 %甲酸溶液，搖勻后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

GB/T 20743-2006 豬肉、豬肝和豬腎中桿菌肽殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

圖1 豬肉、豬肝和豬腎中桿菌肽殘留量測(cè)定的前處理流程圖